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一、試劑盒組成、儲(chǔ)存、穩(wěn)定性 試劑盒組成 保存 50 次 （DP4021） 100 次 （DP4022） 200 次 （DP4023） 抽提液 室溫 50 ml 100 ml 200 ml 蛋白酶 K（溶液 A） -20℃ 20 mg 20 mg×2 20 mg×4 溶菌酶 -20℃ 2.5ml 5ml 10ml 溶液 B 室溫 10 ml 20 ml 40 ml 蛋白沉淀液 室溫 30 ml 60 ml 120 ml 溶液 C 4℃(一個(gè)月） -20℃(長(zhǎng)期) 25 ml 50 ml 100 ml 溶液 D 室溫 5 ml 10 ml 20 ml 結(jié)合液 DB 室溫 25 ml 50 ml 100 ml 去蛋白液 PE 室溫 25 ml 50 ml 100 ml 漂洗液 WB 室溫 15 ml 25ml 50 ml 第一次使用前按說(shuō)明加指定量乙醇 洗脫緩沖液 EB 室溫 5 ml 10 ml 20 ml 純化柱 室溫 50 套 100 套 200 套 吸附柱 AC 室溫 50 套 100 套 200 套 本試劑盒在室溫儲(chǔ)存 12 個(gè)月不影響使用效果。 注意事項(xiàng) 1． 溶液 B 低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在 65℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢 復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。 2． 避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、PH 值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋 緊蓋子。 二、原理簡(jiǎn)介 獨(dú)特的抽提和裂解體系迅速裂解細(xì)胞（壁）和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，不需 要借助玻璃珠破壁，有效保證了基因組 DNA 的完整性，經(jīng)過(guò)特殊處理的純化 柱能有效的去除雜質(zhì)和腐殖酸，極大的提高了 DNA 的純度，用本試劑盒快速 簡(jiǎn)便（1 小時(shí)內(nèi)）提取基因組 DNA 純度極高，適合做 PCR 等下游反應(yīng)。 三、試劑盒特點(diǎn) 1． 經(jīng)過(guò)特殊處理的純化柱能有效的去除雜質(zhì)和腐殖酸。 2． 兼容性強(qiáng)，適用于各種不同的淤泥、糞便以及其他 soil. 3． 不需要使用有毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。 4． 快速，簡(jiǎn)捷，單個(gè)樣品操作一般可在 60 分鐘內(nèi)完成。 5． 高純度，OD260/OD280典型的比值達(dá) 1.7～1.9，長(zhǎng)度可達(dá) 50kb 以上， 可直接用于 PCR，Southern-blot 和各種酶切反應(yīng)。 四、注意事項(xiàng)（實(shí)驗(yàn)前必須首先閱讀這部分?。? 1． 所有的離心步驟均可在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13，000 rpm 的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。 溶液 B 低溫容易形成沉淀，可在 65℃水浴幫助溶解。 2． 請(qǐng)自備 70%乙醇 3．樣品必須是新鮮采樣或保存于-80℃，樣品不能常溫保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。 【百泰克生物】定貨熱線：010－62951781，85640667 Email:info@bioteke.com 【百泰克生物】定貨熱線：010－62951781，85640667 Email:info@bioteke.com -5- －2－ 五、操作步驟 a．準(zhǔn)確稱量 0.1--0.3g 的新鮮樣品到干凈的離心管中，加入 1ml 的抽提液，加 入 10ul 的蛋白酶 K 和 50ul 的溶菌酶，Vortex 2-3 分鐘，至到顛倒混勻離心管 時(shí)，土樣不會(huì)聚在管底或輕彈即可散開(kāi)，充分混勻后 37℃水浴 20 分鐘（水浴時(shí)， 每隔 1-2 分鐘震蕩混勻，使土樣均勻散開(kāi)，不聚在管底為好）。 b．加入 200ul 溶液 B，Vortex 2-3 分鐘，充分混勻后 65℃水浴 10 分鐘（水浴 時(shí)，每隔 1-2 分鐘震蕩混勻，使土樣均勻散開(kāi)，不聚在管底為好）。 c．13000rpm 離心 10 分鐘取上清至新的 1.5ml 離心管。 d. 加入 1/2 體積的蛋白沉淀液，充分顛倒混勻。 e. 冰浴 8 分鐘，13000rpm 離心 10 分鐘取上清。 f.在上清液加入 500ul 的溶液 C，充分顛倒混勻。 g.將步驟 f 得到的混合液加入到純化柱中, 10000rpm 離心 1 分鐘過(guò)濾,收集下濾 液（下濾液含有 DNA）。混合液體積大，應(yīng)該分兩次過(guò)濾。 h. 準(zhǔn)確估計(jì)下濾液的體積，加入 0.6 倍體積的異丙醇，充分混勻，13000 rpm 離心 10 分鐘，小心倒掉上層懸液，沉淀倒扣吸水紙 2 分鐘。 i.用 100ul 溶液 D 充分溶解沉淀，加入 5 倍體積的結(jié)合液 DB，上下顛倒混勻， 將混合液倒入吸附柱中，靜置 1 分鐘，13000rpm 離心 1 分鐘，棄下液。 j.在吸附柱中加入 500ul 的去蛋白液 PE，13000rpm 離心 1 分鐘，棄下液。 k. 在吸附柱中加入 700ul 的漂洗液 WB，13000rpm 離心 1 分鐘，棄下液。在吸 附柱中加入 500ul 的漂洗液 WB，13000rpm 離心 1 分鐘，棄下液。將吸附柱重新 放回套管中，13000rpm 離心 3-4 分鐘。 l.將吸附柱轉(zhuǎn)移至新的 1.5ml 離心管中，在吸附柱的中間加入 30-50ul 的洗脫 緩沖液 EB，13000rpm 離心 1 分鐘洗脫 DNA，可立即用于下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)或 -20℃保存。